RAW 264.7，ATCC細(xì)胞株簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱：RAW 264.7

來源：美國(guó)ATCC

數(shù)量：大量

生長(zhǎng)狀態(tài)：貼壁生長(zhǎng)

組織來源：ascites

細(xì)胞形態(tài)：?jiǎn)魏思?xì)胞/巨噬細(xì)胞

相關(guān)疾病：其他疾病

品系：BALB/c

是否是腫瘤細(xì)胞：0

物種來源：小鼠

運(yùn)輸方式：凍存運(yùn)輸

庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨

復(fù)蘇周期：10個(gè)工作日左右

美國(guó)ATCC品牌介紹：美國(guó)菌種保藏中心，又稱美國(guó)模式菌種收集中心(ATCC)，是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營(yíng)的，非贏利性組織。目前它可以提供各種動(dòng)植物細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)品、菌株達(dá)兩萬(wàn)多種。ATCC的成立可追溯到1925年，一個(gè)科學(xué)委員會(huì)認(rèn)識(shí)到科學(xué)研究對(duì)于微生物的大量需求而萌發(fā)了創(chuàng)建一個(gè)微生物相關(guān)制品供應(yīng)中心的想法?；鄯f生物通過自己的渠道為國(guó)內(nèi)科研以及生產(chǎn)用戶提供美國(guó)ATCC細(xì)胞株、菌株等生物標(biāo)準(zhǔn)品。貨期短，*，不需要客戶填寫詳細(xì)資料，幫客戶辦理一切海關(guān)手續(xù)，方便快捷！

RAW 264.7，ATCC細(xì)胞株，細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，經(jīng)常見到黑色的顆?；蛐『邳c(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？

原因：

黑點(diǎn)，大概有細(xì)胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細(xì)胞間的， 還有就是血清和培養(yǎng)基。

解決辦法：

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì)，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢(shì)，且不影響細(xì)胞生長(zhǎng)，也不影響實(shí)驗(yàn)的話，則可能

a、是「黑膠蟲」，黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來的一種原蟲，也有人認(rèn)為是細(xì)菌，或是真菌，也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶?！负谀z蟲」可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代?！负谀z蟲」與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒有什么影響，但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候， 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡，嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開展和進(jìn)行。以前（這個(gè)至少是 10 年以前），很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過關(guān)，有所謂的「黑膠蟲」，但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清，即使國(guó)產(chǎn)的，如四季青等稍大點(diǎn)的廠家，產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。

b、是細(xì)胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運(yùn)動(dòng)。

c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)

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，傳代培養(yǎng)

懸浮細(xì)胞:

1.懸浮細(xì)胞常規(guī)傳代操作為半量換液，分瓶傳代，即取出一半細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；也可根據(jù)細(xì)胞密度分多瓶傳代。

2.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時(shí)重復(fù)傳代操作或者凍存。

半貼壁半懸浮細(xì)胞：

1.若懸浮細(xì)胞較多且折光率良好，可離心收集，繼續(xù)培養(yǎng)。

2.若有少量細(xì)胞懸浮，也可不用收集，傳代操作按常規(guī)貼壁細(xì)胞操作流程處理。

3.若懸浮細(xì)胞較多，離心收集，原瓶中貼壁細(xì)胞按照常規(guī)規(guī)貼壁細(xì)胞操作流程進(jìn)行消化、終止消化、吹打，并與之前收集的懸浮細(xì)胞混懸，分瓶培養(yǎng)。

貼壁細(xì)胞:

1.吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 含0.25% EDTA的胰酶進(jìn)行消化（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?~2min）

2.鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小時(shí)去掉胰酶，加6~8 ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落、吹散；

3.取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4.注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%以后重復(fù)傳代操作或者凍存。

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