人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞BT-474【BT-474】細(xì)胞株；BT-474細(xì)胞株，人乳腺癌細(xì)胞，BT-474價(jià)格，BT-474細(xì)胞來(lái)源，BT-474培養(yǎng)條件，細(xì)胞株細(xì)胞系，人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞BT-474形態(tài)，BT-474消化，BT-474人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞株；盡在慧穎生物，訂購(gòu)：！

細(xì)胞來(lái)源：人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)介：BT-474細(xì)胞為人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞，來(lái)源于人乳腺導(dǎo)管癌，中文名為人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞，正常的細(xì)胞形態(tài)為上皮樣，貼壁生長(zhǎng)。

培養(yǎng)基：RPMI-1640 90%, Fetal Bovine Serum 10%

培養(yǎng)條件：37℃ 5% CO2

消化條件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53 mM EDTA溶液，消化5-10min

傳化比例：1：2-1：3

換液時(shí)間：3-4天換液一次

凍存液比例：85%培養(yǎng)基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO

凍存密度：1-3 ×10^6/管，液氮保存

庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨

細(xì)胞純度：94％

細(xì)胞活力：90％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）

細(xì)胞檢測(cè)：細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

慧穎生物出售高品質(zhì)，傳代次數(shù)少，細(xì)胞飽滿，光澤度好，來(lái)源背景清晰，售后跟蹤及時(shí)到位，*的人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞BT-474【BT-474】細(xì)胞株@慧穎細(xì)胞庫(kù)出售400多種類細(xì)胞株細(xì)胞系，20多株耐藥株，細(xì)胞來(lái)源：中科院、美國(guó)ATCC、復(fù)旦大學(xué)、交通大學(xué)、DSMZ、UKNCC、BCRC、日本東京大學(xué)、日本IKA中心、Sciencell等。一對(duì)一服務(wù)，隨時(shí)解決細(xì)胞培養(yǎng)中疑難問(wèn)題，跟蹤及時(shí)到位，幫您一起完成報(bào)告。

注意事項(xiàng)：

高壓消毒實(shí)驗(yàn)用品：操作臺(tái)上不是一次性的物品均需做滅菌處理，無(wú)法高壓的物品應(yīng)使用75%酒精消毒。

消毒操作間和操作臺(tái)：使用75%酒精擦拭無(wú)菌間的墻面、地面，操作臺(tái)的臺(tái)面，孵箱，離心機(jī)等。操作前須用紫外線照射無(wú)菌間和操作臺(tái)30分鐘消毒。入無(wú)菌間須穿隔離服，戴手套、口罩、帽子。用75%酒精洗去手套上的滑石粉。

無(wú)菌操作：操作時(shí)應(yīng)盡量接近酒精燈；拿取吸管時(shí)，避免接觸其使用端；不要在開口器皿的上方操作；吸取不同液體應(yīng)更換吸管。不能碰瓶口。萬(wàn)一碰到，更換吸管。

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青霉素G紙片    10u

氨芐西林(氨芐青霉素)紙片    10ug

苯唑青霉素紙片  1ug

哌拉西林紙片    100ug

頭孢呋辛(西力欣.頭孢呋肟)紙片   30ug

頭孢唑啉紙片    30ug

頭孢哌酮(先鋒必)紙片    75ug

頭孢曲松紙片    30ug

頭孢噻肟紙片    30ug

頭孢他啶紙片    30ug

利福平紙片  5ug

鏈霉素紙片  10ug

鏈霉素紙片  300ug

卡那霉素紙片    30ug

慶大霉素紙片    10ug

慶大霉素紙片    120ug

四環(huán)素紙片  30ug

氯霉素紙片  30ug

紅霉素紙片  15ug

多粘菌素B紙片  30ug

復(fù)方新諾明SMZ/TMP紙片  25ug

林可霉素紙片    2ug

萬(wàn)古霉素紙片    30U

環(huán)丙沙星紙片    5ug

阿莫西林紙片    10ug

洛美沙星紙片    10ug

克拉霉素紙片    15ug

左氟沙星紙片    5ug

羅紅霉素紙片    15ug

磷霉素紙片  200ug

氧氟沙星紙片    5ug

氨芐西林/棒酸紙片   30ug

克林霉素紙片    2ug

甲氧芐啶紙片    5ug

阿莫西林/棒酸紙片   20/10ug

丁胺卡那紙片    30ug

頭孢哌酮/舒巴坦紙片 75/75ug

諾氟沙星紙片    10ug

氟羅沙星紙片    5ug

氨曲南紙片  30ug

亞胺培南紙片    10ug

強(qiáng)力霉素紙片    30ug

加替沙星紙片    5ug

司帕沙星紙片    5ug

頭孢他啶/棒酸紙片   30/10ug

頭孢噻肟/棒酸紙片   30/10ug

氨芐西林/舒巴坦紙片 10/10ug

阿奇霉素紙片    15ug

米諾環(huán)素紙片    30ug

的培養(yǎng)

【初代培養(yǎng)原理】

將動(dòng)物機(jī)體的各種組織從機(jī)體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機(jī)械方法處理，分散成單細(xì)胞，置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖，這一過(guò)程稱原代培養(yǎng)。

儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃），培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計(jì)數(shù)板、離心機(jī)、水浴箱（37℃）

材料：動(dòng)物組織塊

試劑：1640培養(yǎng)基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒

【初代消化培養(yǎng)法】

（1）準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

（2）布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

（3）處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

（4）剪切：用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。

（5）消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

（6）分離：在消化過(guò)程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500~1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

（7）計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2~7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO23調(diào)整。

（8）培養(yǎng)：置于36.5℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

【初代組織塊培養(yǎng)法】

《1》剪切：把組織小塊置于小燒杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸靜Hanks液，用眼科剪反復(fù)剪切1mm3塊為止。

《2》擺布：用彎頭吸管吸取若干小塊，置于培養(yǎng)瓶中，用吸管彎頭把組織小塊擺布在培養(yǎng)瓶底部，小塊相互距離以0.5cm為宜，每一25ml培養(yǎng)瓶底可擺布20~30塊。

《3》輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，另瓶底向上，注意翻瓶時(shí)勿另組織小塊流動(dòng)，塞好瓶塞，置36.5℃溫箱培養(yǎng)2小時(shí)左右（勿超過(guò)4小時(shí)），使小塊微干涸。

《培養(yǎng)》從微箱中取出培養(yǎng)瓶，開塞，46度斜持培養(yǎng)瓶，箱瓶底腳部輕輕注入培養(yǎng)液少許，然后緩緩再把培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)，讓培養(yǎng)液慢慢覆蓋附于瓶地上的組織小塊。置溫箱中靜止培養(yǎng)。待細(xì)胞從組織塊游出數(shù)量增多后。再補(bǔ)加培養(yǎng)液。

【傳代培養(yǎng)法原理】

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。 傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

【材料和試劑】

1）細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株

2）試劑：0.25％胰酶、DMEM 90%,德國(guó)SERANA胎牛血清 Fetal Bovine Serum 10%

3）儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等

【操作步驟】

1）吸除培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。

2）向瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶和EDTA混合液少許，以能覆滿瓶底為限。

3）置溫箱中2~5分鐘，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)回縮，細(xì)胞間隙增大后，立即終止消化。

4）吸除消化液，向瓶?jī)?nèi)注入Hanks液數(shù)毫升，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細(xì)胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細(xì)胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为?dú)消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養(yǎng)液。

5）用吸管吸取營(yíng)養(yǎng)液輕輕反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，使之從瓶壁脫離形成細(xì)胞懸液。

6）計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)后，把細(xì)胞懸液分成等份分裝入數(shù)個(gè)培養(yǎng)瓶中，置溫箱中培養(yǎng)。

hFOB1.19人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞株

HaCaT人永生化表皮細(xì)胞株

A431人皮膚鱗癌細(xì)胞株

CNE人鼻咽癌細(xì)胞株

MG69人骨肉瘤細(xì)胞株

注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。