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產(chǎn)品名稱:NK-92細(xì)胞
中文名稱:人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞
生長狀態(tài):懸浮生長
形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞
特征特性:NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株白細(xì)胞介素-2依賴型NK細(xì)胞株。 這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性;鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。 NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。 NK-92細(xì)胞有以下特征: CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽性,CD56亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, C
NK-92細(xì)胞,用10%胎牛+10%馬血清 +50μg/mlKANA+MEM培養(yǎng)液,37℃ 下置于5%CO2培養(yǎng)箱中。待細(xì)胞融合至80%,用0.25%胰酶消化傳代后接種(細(xì)胞密度5 XlO4)于培養(yǎng)瓶或孔板,待細(xì)胞融合至約70%后用于實(shí)驗(yàn)。
細(xì)胞株培養(yǎng)方法如下:
1.貼壁細(xì)胞換液:
1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。
2)用1xD-hank`s洗一次。
3)加入適量的新鮮培養(yǎng)液,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
2.懸浮細(xì)胞換液
1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液放入15ml離心管中離心1500rpm 5min。
2)細(xì)胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。
3)加入適量的新鮮培養(yǎng)液,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
3.細(xì)胞傳代(貼壁細(xì)胞傳代采用胰酶消化法,常用消化液為0.25%的胰蛋白液)
1)吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液。
2)用1xD-hank`s洗一次。
3)加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn))。
4)靜止2-10分鐘(顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測)。
5)吸去胰蛋白酶液,加入培養(yǎng)基。
6)用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液,反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞,形成細(xì)胞懸液。
7)吸取1/5-1/10細(xì)胞懸液接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
8)加入適量的新鮮培養(yǎng)液,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi),放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
4.細(xì)胞凍存:
1)預(yù)先配制凍存液:90%胎牛血清+10%DMSO
2)取對數(shù)期生長細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后加入培養(yǎng)液終止胰酶反應(yīng),離心(1500rpm 5min)去上清留沉淀加適量凍存液,用吸管吸打制成細(xì)胞懸液(1 XlO5-5X106/ml)
3)加入1ml細(xì)胞懸液于凍存管中,密封后標(biāo)記凍存細(xì)胞名稱和凍存日期。
5.細(xì)胞復(fù)蘇:
1)從液氮中取出凍存管,迅速投入37度-38度水浴中
2)使其融化5min內(nèi)用培養(yǎng)液稀釋至原液體的10倍以上,低速離心1500rpm 5min
3)去上清,加入培養(yǎng)液,細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)
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