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人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-10
  • 簡(jiǎn)要描述:人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒
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人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒

使用范圍:僅供科研檢測(cè),不得用于臨床。

保存條件:2-8℃

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特點(diǎn):靈敏性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好

服務(wù):慧穎生物所有的elisa試劑盒均免費(fèi)代測(cè),全程Elisa實(shí)驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo),免費(fèi)代做實(shí)驗(yàn)。

人腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理:

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗ITF抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗ITF抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的ITF呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。

  1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。

為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

  1. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
  2. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
  3. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
  4. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
  5. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
  6. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
  7. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

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