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CNE1-lmpl( 轉lmpl基因鼻咽癌細胞)詳細描述:
CNE1-lmpl( 轉lmpl基因鼻咽癌細胞)培養(yǎng)細胞的常規(guī)觀察:
細胞接種或傳代以后,實驗者每天或至多間隔1~2d,要對細胞做常規(guī)性檢查。觀察細胞形態(tài)和生長情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無污染等。根據細胞動態(tài)變化,做換液或傳代處理,如發(fā)現異常情況應及時采取措施。
檢測原理:
細胞發(fā)生凋亡或壞死,其細胞DNA均發(fā)生斷裂,細胞內小分子量片斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DNA片斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規(guī)律的發(fā)生在核小體之間,出現180-200bp片斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區(qū)別。
檢測步驟:
1.將凋亡細胞裂解后高速離心,其上清液中含有核小體
2.在微定量板上吸附組蛋白體
3.加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合
4.加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結合
5.加酶的底物,測光吸收制
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