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細胞培養(yǎng)技術(shù)屬于細胞工程范疇,細胞工程包括細胞融合技術(shù)、單克隆抗體的制備、核移植技術(shù)(克?。┑?而這些技術(shù)中都有細胞培養(yǎng)過程,所以說細胞培養(yǎng)是生物學(xué)研究的zui基本技術(shù)之一。
上?;鄯f生物供應(yīng)A549/DDP耐順鉑肺癌細胞,DDP終濃度1-2ug/ml,活性好、存活率高。隨著細胞生物學(xué)尤其是干細胞研究的快速發(fā)展,在細胞治療領(lǐng)域已經(jīng)進行了大量的探索,取得了一系列的令人振奮的成果,且部分基礎(chǔ)研究成果已經(jīng)在心血管系統(tǒng)疾病 、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關(guān)疾病、糖尿病等。
養(yǎng)細胞經(jīng)驗分享:
1.細胞形態(tài)觀察。細胞膜是每天必須觀察的,看是否清晰,細胞的死亡往往是從細胞膜的破裂開始的,早期的表現(xiàn)就是細胞膜某一點出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。
2.細胞往往會有“抱團”現(xiàn)象,抱團生長或死亡,個人認為應(yīng)該勤換液或傳代,盡量避 免細胞抱團。
3.細胞生長迅速,強烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng),用小瓶養(yǎng)的話,換液不及時,很容易死 亡。細胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代,并且一般為一傳三,或一傳四。
4.培養(yǎng)液:1640|DMEM|MEM|IMDM|a-MEM培養(yǎng)液,1L一般加碳酸氫鈉2g,并加雙抗,胎牛血清濃度*為12%,zui低不低于10%,有些細胞對胎牛血清高度依賴,比如WRO細胞,HT-22細胞,HA-VSMC細胞,NK-92細胞等。培養(yǎng)液PH應(yīng)調(diào)為7.20-7.40之間。
5.防污染。L-02細胞生長迅速,較少發(fā)生污染,但常規(guī)措施應(yīng)該做好。比如無菌操作,酒精 消毒等,培養(yǎng)瓶口建議過火,包括瓶蓋,應(yīng)過火4秒左右。
6.凍存。-20一小時,-80次夜,液氮長期保存。強烈建議液氮長期保存,盡量不要在-80長期 保存,死亡率很高。
7.復(fù)蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃,并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液,使培養(yǎng)液溫度與室溫一 致。1分鐘內(nèi)融化細胞(禁止搖晃凍存管),移取至試管內(nèi),動作要輕,從試管管底開始慢慢上提 移液管,使細胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻,離心,洗2次。
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其它經(jīng)驗概括:
細胞類型 編輯 細胞類型根據(jù)是否附于支持物上生長的特性,分為 貼附型、懸浮型。 貼附型 細胞貼附在支持物表面生長,只依賴貼附才能生長的細胞叫做貼附型細胞(Anchorrage-dependent cells)這種現(xiàn)象與細胞分化有關(guān)。 貼附型細胞的分型 1.成纖維型細胞:(fibroblast) 來自中胚層 特點:與體內(nèi)成纖維細胞形態(tài)相似,胞體梭型或不規(guī)則三角形,中央有圓形核,胞質(zhì)向外伸出2~3個長短不同的突起。細胞在生長時呈放射狀,漩渦或火焰狀走行。 起源:細胞來自中胚層間充質(zhì)組織。 除真正的成纖維細胞、心肌、平滑肌、成骨細胞、血管內(nèi)皮細胞。 注意:細胞在培養(yǎng)時成為成纖維型細胞是一種慣稱,與體內(nèi)細胞不同。 2.上皮型細胞(epithlium cell type) 來自外胚層。 特點:扁平不規(guī)則多角型、圓形核、細胞緊密相連成細胞增殖數(shù)目增多時,整個上皮膜隨之移動。邊緣細胞很少脫離細胞群而單獨活動“ 拉網(wǎng)”現(xiàn)象與起源內(nèi)外胚層組織有關(guān)。 組織: 皮膚表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。 3. 游走型細胞(wandering cell type) 特點:在支持物上散在生長,不連接成片,胞質(zhì)伸出偽足或突起呈活躍的游走或變形運動,速度快不規(guī)則, 密度大連接成片呈多角形不易與其他類型的細胞 區(qū)別。 4. 多形型細胞(polymorphic cell type) 特點: 無規(guī)律的形態(tài),如神經(jīng)細胞。 懸浮型 特點: 不貼附在支持物生長,胞體圓形,在培養(yǎng)液中生長空間大,可長時間的生長,繁殖旺盛便于做細胞代謝研究。S180肉瘤、血液里的白細胞、K562、 HL-60。 分型的目的: 方便描述細胞在培養(yǎng)過程中的形態(tài)變化。培養(yǎng)條件好時,細胞相對穩(wěn)定,可反映出起源、正常異常的區(qū)別,作為判定細胞生物學(xué)性狀指標(biāo)。 強調(diào):一般形態(tài)并不是一項可靠指標(biāo)要受各方面影響。 如:反復(fù)開關(guān)溫箱、溫度、C02的濃度、培養(yǎng)基變堿、支原體、pH值。細胞在接種時呈三角型狀態(tài),經(jīng)培養(yǎng)一定時間后,細胞在傳代前已形成上皮型細胞。
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