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HuH-7 肝癌細(xì)胞,進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)慧穎生物一站式采購(gòu)商城,細(xì)胞株細(xì)胞系,耐藥株,STR鑒定,各品牌進(jìn)口胎牛血清,培養(yǎng)基,胰酶,雙抗,*培養(yǎng)基,PBS緩沖液,DMSO,細(xì)胞生長(zhǎng)因子等,種類(lèi)齊全,*!
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)屬于細(xì)胞工程范疇,細(xì)胞工程包括細(xì)胞融合技術(shù)、單克隆抗體的制備、核移植技術(shù)(克?。┑?而這些技術(shù)中都有細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程,所以說(shuō)細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)研究的zui基本技術(shù)之一。
上?;鄯f生物供應(yīng)HuH-7 肝癌細(xì)胞,進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)活性好、存活率高。隨著細(xì)胞生物學(xué)尤其是干細(xì)胞研究的快速發(fā)展,在細(xì)胞治療領(lǐng)域已經(jīng)進(jìn)行了大量的探索,取得了一系列的令人振奮的成果,且部分基礎(chǔ)研究成果已經(jīng)在心血管系統(tǒng)疾病 、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關(guān)疾病、糖尿病等。
養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)分享:
1.細(xì)胞形態(tài)觀察。細(xì)胞膜是每天必須觀察的,看是否清晰,細(xì)胞的死亡往往是從細(xì)胞膜的破裂開(kāi)始的,早期的表現(xiàn)就是細(xì)胞膜某一點(diǎn)出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。
2.細(xì)胞往往會(huì)有“抱團(tuán)”現(xiàn)象,抱團(tuán)生長(zhǎng)或死亡,個(gè)人認(rèn)為應(yīng)該勤換液或傳代,盡量避 免細(xì)胞抱團(tuán)。
3.細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,強(qiáng)烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng),用小瓶養(yǎng)的話,換液不及時(shí),很容易死 亡。細(xì)胞的生長(zhǎng)速度一般為2天左右就需要傳代,并且一般為一傳三,或一傳四。
4.培養(yǎng)液:1640|DMEM|MEM|IMDM|a-MEM培養(yǎng)液,1L一般加碳酸氫鈉2g,并加雙抗,胎牛血清濃度*為12%,zui低不低于10%,有些細(xì)胞對(duì)胎牛血清高度依賴(lài),比如WRO細(xì)胞,HT-22細(xì)胞,HA-VSMC細(xì)胞,NK-92細(xì)胞等。培養(yǎng)液PH應(yīng)調(diào)為7.20-7.40之間。
5.防污染。L-02細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,較少發(fā)生污染,但常規(guī)措施應(yīng)該做好。比如無(wú)菌操作,酒精 消毒等,培養(yǎng)瓶口建議過(guò)火,包括瓶蓋,應(yīng)過(guò)火4秒左右。
6.凍存。-20一小時(shí),-80次夜,液氮長(zhǎng)期保存。強(qiáng)烈建議液氮長(zhǎng)期保存,盡量不要在-80長(zhǎng)期 保存,死亡率很高。
7.復(fù)蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃,并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液,使培養(yǎng)液溫度與室溫一 致。1分鐘內(nèi)融化細(xì)胞(禁止搖晃凍存管),移取至試管內(nèi),動(dòng)作要輕,從試管管底開(kāi)始慢慢上提 移液管,使細(xì)胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻,離心,洗2次。
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其它經(jīng)驗(yàn)概括:
細(xì)胞類(lèi)型 編輯 細(xì)胞類(lèi)型根據(jù)是否附于支持物上生長(zhǎng)的特性,分為 貼附型、懸浮型。 貼附型 細(xì)胞貼附在支持物表面生長(zhǎng),只依賴(lài)貼附才能生長(zhǎng)的細(xì)胞叫做貼附型細(xì)胞(Anchorrage-dependent cells)這種現(xiàn)象與細(xì)胞分化有關(guān)。 貼附型細(xì)胞的分型 1.成纖維型細(xì)胞:(fibroblast) 來(lái)自中胚層 特點(diǎn):與體內(nèi)成纖維細(xì)胞形態(tài)相似,胞體梭型或不規(guī)則三角形,中央有圓形核,胞質(zhì)向外伸出2~3個(gè)長(zhǎng)短不同的突起。細(xì)胞在生長(zhǎng)時(shí)呈放射狀,漩渦或火焰狀走行。 起源:細(xì)胞來(lái)自中胚層間充質(zhì)組織。 除真正的成纖維細(xì)胞、心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞。 注意:細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)成為成纖維型細(xì)胞是一種慣稱(chēng),與體內(nèi)細(xì)胞不同。 2.上皮型細(xì)胞(epithlium cell type) 來(lái)自外胚層。 特點(diǎn):扁平不規(guī)則多角型、圓形核、細(xì)胞緊密相連成細(xì)胞增殖數(shù)目增多時(shí),整個(gè)上皮膜隨之移動(dòng)。邊緣細(xì)胞很少脫離細(xì)胞群而單獨(dú)活動(dòng)“ 拉網(wǎng)”現(xiàn)象與起源內(nèi)外胚層組織有關(guān)。 組織: 皮膚表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。 3. 游走型細(xì)胞(wandering cell type) 特點(diǎn):在支持物上散在生長(zhǎng),不連接成片,胞質(zhì)伸出偽足或突起呈活躍的游走或變形運(yùn)動(dòng),速度快不規(guī)則, 密度大連接成片呈多角形不易與其他類(lèi)型的細(xì)胞 區(qū)別。 4. 多形型細(xì)胞(polymorphic cell type) 特點(diǎn): 無(wú)規(guī)律的形態(tài),如神經(jīng)細(xì)胞。 懸浮型 特點(diǎn): 不貼附在支持物生長(zhǎng),胞體圓形,在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)空間大,可長(zhǎng)時(shí)間的生長(zhǎng),繁殖旺盛便于做細(xì)胞代謝研究。S180肉瘤、血液里的白細(xì)胞、K562、 HL-60。 分型的目的: 方便描述細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中的形態(tài)變化。培養(yǎng)條件好時(shí),細(xì)胞相對(duì)穩(wěn)定,可反映出起源、正常異常的區(qū)別,作為判定細(xì)胞生物學(xué)性狀指標(biāo)。 強(qiáng)調(diào):一般形態(tài)并不是一項(xiàng)可靠指標(biāo)要受各方面影響。 如:反復(fù)開(kāi)關(guān)溫箱、溫度、C02的濃度、培養(yǎng)基變堿、支原體、pH值。細(xì)胞在接種時(shí)呈三角型狀態(tài),經(jīng)培養(yǎng)一定時(shí)間后,細(xì)胞在傳代前已形成上皮型細(xì)胞。
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