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慧穎生物有10年SNP分型經(jīng)驗(yàn),已經(jīng)完成的SNP分型數(shù)據(jù)近千萬(wàn),采用LDR技術(shù)發(fā)表的SCI論文數(shù)百篇,并且有3篇發(fā)表于*期刊Nature Genetics上。具有市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格!我們公司還有SNP分型服務(wù);STR分型;分子遺傳學(xué)、分子生物學(xué)服務(wù)(SNP/STR分型、CNV檢測(cè)、測(cè)序、Real time qPCR、microRNA檢測(cè)、MCF基因表達(dá)分析系統(tǒng)、定制PCR array)
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè) (TUNEL Apoptosis Assay)是一種高靈敏度又快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。對(duì)于待檢測(cè)的細(xì)胞或組織樣品,經(jīng)過(guò)生物素標(biāo)記和后續(xù)的DAB顯色等步驟,即可在普通光學(xué)顯微鏡下觀察到凋亡細(xì)胞。
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí),會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè),可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。
基因組DNA斷裂時(shí),暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP(Biotin-dUTP),隨后和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的Streptavidin (Streptavidin-HRP)結(jié)合,zui后在HRP的催化下通過(guò)DAB顯色來(lái)顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過(guò)普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到凋亡的細(xì)胞。
技術(shù)步驟
1. 材料與試劑 (以Promega試劑盒為例),包括:
(1)生物素標(biāo)記的-dUTP(Biotin-dUTP)或地高辛標(biāo)記的-dUTP(Digoxingeningll-dUTP) 1 nmol/µL
(2)TdT酶(25U/μL)
(3)反應(yīng)緩沖液
(4)洗滌緩沖液
(5)異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的親合素或鏈霉親合素(2.5µg/mL)或抗地高辛抗體(1︰30)
(6)PI染液(含PI 5µg/mL及無(wú)DNA酶活性的RNA酶0.1%)
(7)PBS緩沖液
(8)塑料蓋玻片
2. 樣品
(1)懸浮生長(zhǎng)培養(yǎng)細(xì)胞的甩片或涂片
(2)貼壁生長(zhǎng)的培養(yǎng)細(xì)胞
(3)冰凍切片
(4)常規(guī)石蠟切片
3. 操作方法
(1)固定:培養(yǎng)細(xì)胞的制片或冰凍切片用4%多聚甲醛固定30min(4℃)后,用80%酒精再固定2h(-20℃)。常規(guī)4%中性福爾馬林固定、石蠟包埋之切片進(jìn)行脫蠟、水化。
(2)洗滌:玻片浸入PBS緩沖液,搖床上洗滌5min,三次。
(3)反應(yīng):洗滌后的玻片用吸水紙吸干細(xì)胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加反應(yīng)液(每50μL反應(yīng)液含TdT酶0.5μL,標(biāo)記的-dUTP 1μL),使反應(yīng)液均勻地覆蓋于所有細(xì)胞或組織切片上,蓋上塑料蓋玻片,置濕盒中,37℃孵育1h。
(4)終止反應(yīng):去掉塑料蓋玻片,將玻片置盛有洗滌緩沖液的染色缸內(nèi),洗滌兩次,每次5min。
(5)FITC標(biāo)記:洗滌后的玻片用吸水紙吸去細(xì)胞或組織周圍水分,按50μl/cm2滴加FITC反應(yīng)液(含F(xiàn)ITC 2.5μg/mL),室溫下避光孵育10min。
(6)洗滌:將玻片置于洗滌緩沖液內(nèi),洗兩次,每次5min。
(7)PI復(fù)染:將玻片置于盛有PI染液的染色缸內(nèi),室溫下避光染色30min。
(8)封片:用蓋玻片直接蓋在含PI染液的玻片上,亦可用無(wú)色指甲油涂于蓋玻片四周邊緣,置暗盒中,盡早鏡檢觀察。
4. 結(jié)果判定:用熒光顯微鏡觀察,選用藍(lán)色激發(fā)光(波長(zhǎng)488nm),所有的細(xì)胞核均被PI著色,顯示出紅色熒光,而凋亡細(xì)胞被特異地標(biāo)記上FITC,顯示出黃綠色熒光。
應(yīng)用領(lǐng)域
細(xì)胞凋亡(apoptosis)的分析方法,細(xì)胞凋亡有一項(xiàng)重要的特征為細(xì)胞內(nèi)的DNA會(huì)碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測(cè)DNA片段的產(chǎn)生。
服務(wù)周期
交貨時(shí)間: 15~20天
客戶須知(對(duì)材料的要求、注意事項(xiàng))
結(jié)果提供: 正常和陽(yáng)性對(duì)照玻片及其1張數(shù)碼照片,剩余石蠟塊,檢測(cè)報(bào)告;
樣本要求:取材保持組織新鮮(組織塊以小于2cm×1.5cm×0.3cm為宜),立即放入固定液(固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液,體積為組織塊的10倍以上)中,避免干燥;對(duì)于有血跡的樣本,可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中;經(jīng)固定后的樣本必須在48小時(shí)內(nèi)處理。
慧穎生物專業(yè)血清10年,我們不生產(chǎn)血清,我們只是高品質(zhì)動(dòng)物血清的搬運(yùn)工
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產(chǎn)品名稱 貨號(hào) 來(lái)源 規(guī)格 市場(chǎng)價(jià)格
胎牛血清FBS 10270-106 SOUTH AMERICA 500ML 3200
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胎牛血清FBS c2027050 SOUTH AMERICA 500ML 2600
優(yōu)等胎牛血清FBS 10437-028 Mexico 500ML 3200
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優(yōu)等胎牛血清FBS 10099-141 AUSTRALIA 500ML 7000
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特級(jí)胎牛血清FBS 16000-044 USA 500ML 5800
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優(yōu)等胎牛血清FBS 26140-079 USA 500ML 3600
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熱滅活胎牛血清FBS heat inactivated 10082-147 USA 500ML 5600
熱滅活胎牛血清FBS heat inactivated 10100-147 AUSTRALIA 500ML 14239
熱滅活胎牛血清FBS heat inactivated 10100-147 AUSTRALIA 500ML 14239
超低IgG胎牛血清Ultra-low IgG FBS 16250-078 USA 500ML 6000
透析胎牛血清Dialyzed FBS 264000-044 USA 500ML 6800
活性炭/葡聚糖處理胎牛血清Charcoal Stripped FBS 12676-029 USA 500Ml 6800
新生牛血清New born calf serum 16010159 New Zealand 500ML 1035
馬血清Horse Serum 16050-122 New Zealand 500ML 909
熱滅活馬血清Heat-Inactivated Horse Serum 26050-088 New Zealand 500Ml 1069
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