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葡聚糖凝膠使用說明
化學和物理性質(zhì) 葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質(zhì)溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。 超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級也可用于批量工藝。
化學穩(wěn)定性 葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。
物理穩(wěn)定性 葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質(zhì)。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。
產(chǎn)品說明:
產(chǎn)品名稱 | 分離范圍 | 應用 |
葡聚糖凝膠G-10 | <700 | 緩沖液交換、脫鹽、分離小分子、去除小分子 |
葡聚糖凝膠G-15 | <1500 | 緩沖液交換、脫鹽、分離小分子、去除小分子 |
葡聚糖凝膠G-25 | 1000-5000 | 工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液 |
葡聚糖凝膠G-50 | 1000-30000 | 多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定 |
葡聚糖凝膠G-75 | 2000-70000 | 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定 |
葡聚糖凝膠G-100 | 2000-120000 | 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定 |
葡聚糖凝膠G-150 | 5000-300000 | 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定 |
葡聚糖凝膠G-200 | 5000-600000 | 蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定 |
使用方法:
1. 乙醇浸泡: 在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;
2. 無鹽水浸泡: 室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;
3. 鹽酸浸泡: 在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;
4. 將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內(nèi),注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內(nèi)產(chǎn)生氣泡或斷層;
5. 上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);
6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調(diào)整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質(zhì)要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可;
7. 洗脫方法: 可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;
8. 在位清洗(CIP) 凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內(nèi)沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。 備注: 其它規(guī)格葡聚糖凝膠處理方法類似。
PS: G-75可以重復使用,一般幾十次都沒問題的。保質(zhì)期2年。
未使用,室溫保存即可。
使用后保存方法如下:凝膠層析的載體不會與被分離的物質(zhì)發(fā)生任何作用,因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次后,由于床體積變小,流動速率降低或雜質(zhì)污染等原因,使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理,其方法是:先用水反復進行逆向沖洗,再用緩沖溶液平衡,即可進行下一次分離。
對使用過的凝膠,若短時間保存,只要反復洗滌除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì),加入適量防腐劑即可;若長期保存,則需將凝膠從柱中取出,進行洗滌、脫水和干燥等處理后,裝瓶保存。
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