標簽抗體

簡介

標簽抗體，別名為抗原表位，又稱抗原決定簇，是抗原分子中決定抗原特異性的特殊區(qū)域或基團，是與抗體特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)或序列。隨著生物技術(shù)的發(fā)展，科研人員可以通過DNA重組技術(shù)，構(gòu)建包含目的基因以及表位標記的融合蛋白，進而通過特異性標簽抗體對其鑒定與純化，以達到研究的需求。

主要類別

Flag抗體-抗Flag

　　融合標簽，如Flag、GST等標簽的使用可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中Flag標簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標蛋白。 　　Flag標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于各種細胞類型，包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等，相應(yīng)的Flag也被廣泛應(yīng)用。由于Flag標簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。Flag標簽可以通過加入腸激酶處理去除，腸激酶專一識別該肽序列C末端的5個氨基酸殘基。 　　Flag抗體可以用于檢測和Flag標簽融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白等。

His抗體-抗His

　　融合標簽根據(jù)其相對分子質(zhì)量大小可以分為兩大類：大的蛋白質(zhì)分子和小的多肽片段。融合標簽的使用可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。 　　His標簽是由6個組氨酸(His-His-His-His-His-His)組成的短肽,專門設(shè)計用于重組蛋白質(zhì)的吸附純化。由于分子量較小，并且較容易分離和純化，His融合標簽與其他標簽相比有很多明顯優(yōu)勢，是目前用于純化的融合標簽中使用的一種。利用 His標簽可以建立一個基于融合蛋白的檢測和純化系統(tǒng)。 　　His抗體可以用于檢測和His標簽融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測His融合表達蛋白等。

GST抗體-抗GST

　　隨著越來越多的新基因的發(fā)現(xiàn)，基因融合蛋白表達體系以其在新發(fā)現(xiàn)蛋白研究中的顯著優(yōu)勢已得到廣泛應(yīng)用。其中GST標簽體系具有蛋白表達產(chǎn)率高、表達產(chǎn)物純化方便，以及利于GST抗體制備等特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。GST融合蛋白可被位點特異性蛋白酶裂解，從而除去GST蛋白。融合蛋白又是一個非常好的強免疫原，因此，很容易制備抗新蛋白的抗體。正是由于以上的優(yōu)點，商品化的GST融合蛋白表達體系以及GST系統(tǒng)至今仍被廣泛應(yīng)用。 　　近年來在原核表達體系中，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶GST表達純化系統(tǒng)的應(yīng)用更為普遍。用GST融合表達系統(tǒng)表達外源基因時，對融合表達產(chǎn)物的檢測和純化非常重要，這里面就包括了GST的應(yīng)用。

GFP抗體-抗GFP

　　常用的標簽包括GFP、HA、Flag、His、GST等。其中綠色螢光蛋白（Green Fluorescent Protein），簡稱GFP，這種蛋白質(zhì)zui早是由下村脩等人在1962年在一種學(xué)名Aequorea victoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍色波長范圍的光線激發(fā)下，會發(fā)出綠色螢光。 　　GFP或其突變體EGFP等被廣泛用于基因表達效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分布。一般來說，GFP抗體不僅可以檢測GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w，也可以檢測和GFP或其適當(dāng)?shù)耐蛔凅w融合表達蛋白的表達、細胞內(nèi)定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。 　　GFP標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于各種細胞類型，包括細菌、酵母和哺乳動物細胞等，相應(yīng)的GFP也被廣泛應(yīng)用。

Myc抗體-抗Myc

　　隨著蛋白質(zhì)組學(xué)的迅猛發(fā)展，重組蛋白質(zhì)的使用在近年來大大增加。重組雜合體含有一個親和標簽如GST、Myc、His等，可用于輔助目標蛋白的純化，這已經(jīng)被廣泛使用。利用融合蛋白有助于重組蛋白純化和檢測的這個有點被廣泛認可。在1985年開發(fā)出鼠抗c-myc并被作為免疫化學(xué)試劑用于細胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域中。Myc標簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應(yīng)用于WB雜交技術(shù)、免疫沉淀IP和流式細胞術(shù)中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。 Myc標簽可放在C端或N端，但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質(zhì)的活力，因此Myc標簽系統(tǒng)廣泛應(yīng)用于檢測但很少用于純化。

HA抗體-抗HA

　　融合標簽，如HA、His等標簽的使用可以簡化蛋白質(zhì)的純化過程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標簽包括myc、HA、Flag、His、GST等。其中HA標簽系統(tǒng)利用一個HA (influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標蛋白。 　　HA標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端，該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細胞類型，相應(yīng)的HA也被廣泛應(yīng)用。HA能特異識別C末端或N末端帶有HA標簽(HA-tagged)的融合蛋白。