玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA檢測試劑盒

一、概要

玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）又稱F-2 毒素，主要成分為禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌等產(chǎn)生的2，4-二羥基苯甲酸內酯類化合物。ZEN 主要污染玉米、麥類、谷物等作物，具有很強的雌性激素作用，可引起豬、大鼠、小鼠、家禽等動物的雌激素過多癥和嚴重的生殖道癥狀及不孕癥，還具有免疫毒性、基因毒性等，對人也有雌激素作用。玉米赤霉烯酮一般用薄層色譜、液相色譜法檢測, 但因其操作繁雜、費用昂貴而影響實際應用。而使用玉米赤霉烯酮ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中玉米赤霉烯酮殘留。

本試劑盒是應用ELISA技術研發(fā)的新一代真菌毒素檢測產(chǎn)品，操作時間低于60min，能zui大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被玉米赤霉烯酮抗原，樣本中玉米赤霉烯酮和此抗原競爭玉米赤霉烯酮的抗體，酶標二抗催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的玉米赤霉烯酮成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中玉米赤霉烯酮的含量。

三、適用范圍

可定性、定量檢測玉米及玉米制品、飼料等樣本中的玉米赤霉烯酮。

四、交叉反應率

玉米赤霉烯酮……………………………………………100%

玉米赤霉酮…………………………………………13%

玉米赤霉醇…………………………………………＜1%

五、檢測步驟

測定前應須知：

1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。

3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。

4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。

5、標品里含有玉米赤霉烯酮，操作時應戴手套操作，避免皮膚接觸。

操作步驟：

1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。

3、洗滌工作液在使用前也需回溫。

4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、加標準品/樣本：加標準品/樣本50?l到對應的微孔中，再加入ZEN酶標物50?l/孔，zui后加入ZEN抗試劑50?l/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應30min。

6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液300?l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

7、顯色：加入底物液A液50?l/孔，再加底物液B液50?l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應15min~20min。

8、測定：加入終止液50?l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止用目測法可進行判定)。

六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度

試劑盒靈敏度：0.05ppb

回收率：

玉米：95±10%

飼料：90±15%

精密度：

試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項

1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。

2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3、每加一種試劑前需將其搖勻。

4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

6、儲存條件

   保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

7、試劑變質的跡象

發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A_450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。

8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min（或更長），但不得超過30min。反之，則減短反應時間。

9、濃縮洗滌液如有結晶屬正?，F(xiàn)象，請加熱溶解后使用。

10、該試劑盒*反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期

     貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。