中文名稱：人絨毛膜促性腺激素（HCG）ELISA試劑盒

規(guī)格：96T

樣本：血清或血漿

品牌：美國Biocheck原裝

貨號：BC-1027

Biocheck人絨毛膜促性腺激素（HCG）-ELISA試劑盒說明書

一、用途：

本試劑盒用于人血清絨毛膜促性腺激素（HCG）的定量測定。

二、試劑盒的組成

1．包被有抗體的微孔板：96孔，1塊。

2．零緩沖液：13mL。

3．酶聯(lián)試劑：18mL。

4．參照標(biāo)準(zhǔn)品：1套（0，5，20，50，150，300mIU/mL）。

5．TMB試劑：1lmL。

6．終止液（1N HCL）：1lmL。

7. 洗滌濃縮液（20X）：50ml，1瓶.

三、自備材料

1．精密吸管：50µL，100µL和150µL。

2．一次性吸頭。

3．蒸餾水。

4．渦旋混合器或等同物。

5．吸水紙或紙巾。

6．坐標(biāo)紙。

7．酶標(biāo)儀，能在450nm處測定吸收值時，要求譜寬≤10nm，光密度值（O.D.）在0~2之間或更大些。

四、樣品的采集和制備

血清由全血樣品制備，用于本試劑盒的血清樣品須無任何添加物。

五、試劑盒的保存

    未啟封的試劑盒須保存在2~8℃下；微孔板存放在有干燥劑的密封袋里，以盡量減少其在潮濕空氣中的暴露；已啟封的試劑盒在上述保存條件下，在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定。

六、試劑的準(zhǔn)備

在檢測前使所有試劑恢復(fù)到室溫（18~25℃，下同）。

制備洗滌緩沖液：按1：19的比例稀釋洗滌濃縮液（20X），即50ml洗滌濃縮液（20X）用蒸餾水或去離子水稀釋至1000ml，已稀釋好的洗滌液在2-8℃下可保存一個月，用前混勻。

七、檢測步驟

1．把所需數(shù)量的微孔固定在微孔架上。

2．分別取50µL標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和對照品加入相應(yīng)的微孔中。

3．取100µL HCG零緩沖液分別加入到每個微孔中。

4．充分混合30秒鐘（此步至關(guān)重要）。

5．室溫溫育30分鐘。

6．翻轉(zhuǎn)微孔板，棄掉溫育混合物。

7．用稀釋的洗滌緩沖液（1X）沖洗5次。

8．在吸水紙或紙巾上扣擊微孔板以*除去微孔板中殘余的水滴。

9．向每個微孔中分別加入150µL酶聯(lián)試劑，輕輕混合10秒鐘。

10．室溫溫育15分鐘。

11．翻轉(zhuǎn)微孔板，棄掉溫育混合物。

12．用稀釋的洗滌緩沖液（1X）沖洗5次。

13．在吸水紙或紙巾上扣擊微孔板以*除去殘余的水滴。

14．取100µL TMB試劑分別加入到每個微孔中，輕輕混合10秒鐘。

15．室溫暗處溫育20分鐘。

16．向每個微孔中加入100µL終止液終止反應(yīng)。

17．輕輕地混合30秒鐘（此步至關(guān)重要，要確保藍(lán)色全部變成黃色）。

18．在15分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處讀出光密度值。

八、結(jié)果計算

    在酶標(biāo)儀上讀出每套參照標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的平均吸收值（A450）。以每個參照標(biāo)準(zhǔn)品的平均吸收值作縱軸（Y），濃度值（mIU/mL）作橫軸（X）在坐標(biāo)紙上繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)每個樣品的平均吸收值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出相應(yīng)的HCG濃度值（mIU/mL）。

九、標(biāo)準(zhǔn)曲線實例

在450nm處測得的光密度值在Y軸上，其相應(yīng)的HCG濃度值在X軸上，得出典型的標(biāo)準(zhǔn)曲線。此標(biāo)準(zhǔn)曲線僅用于示例，不能用于計算未知樣品。每個使用者應(yīng)根據(jù)自己的數(shù)據(jù)制做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

十、期望值和靈敏度

每個實驗室根據(jù)當(dāng)?shù)厝巳航⒆约旱恼Ｖ捣秶?。健康男性和未懷孕健康女性的血清中通常檢測不到HCG。懷孕一周后女性血清的HCG濃度增至5~50mIU/mL，在*周HCG濃度按指數(shù)增長，前三個月達(dá)到zui大值為250，000~500，000mIU/mL，可測得本試劑盒的HCGzui低濃度約為2.0 mIU/mL。