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試驗(yàn)過程中,生物樣本可能是zui敏感的,因?yàn)樗鼈兊幕钚院吞匦砸蕾囉诤线m的試驗(yàn)操作和貯藏條件。實(shí)驗(yàn)室菌種的處理和保藏的程序應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化,使盡可能減少菌種污染和生長特性的改變。按統(tǒng)一操作程序制備的菌株是微生物試驗(yàn)結(jié)果一致性的重要保證。
(一)菌種保藏的重要性
菌種保藏是微生物學(xué)檢驗(yàn)工作中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù),菌種的科學(xué)保藏和管理直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的正確性。
(二)菌種的來源
藥品微生物檢驗(yàn)用的試驗(yàn)菌應(yīng)來自認(rèn)可的國內(nèi)或國外菌種收藏機(jī)構(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株,或使用與標(biāo)準(zhǔn)菌株所有相關(guān)特性等效的商業(yè)派生菌株。
(三)菌種保藏的中心任務(wù)
⒈廣泛收集各種有用的微生物菌種。
⒉選擇zui適宜的保藏方法。
⒊研究、檢驗(yàn)、交換和使用。
(四)菌種保藏的原則
⒈根據(jù)微生物菌種的生理、生化特性,在人工創(chuàng)造的條件下盡量降低微生物細(xì)胞的代謝強(qiáng)度,使細(xì)胞基本上處于休眠狀態(tài),生長繁殖受到抑制但不至于死亡,以減低菌種的變異率。
2.標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活或培養(yǎng)物的制備應(yīng)按供應(yīng)商提供的說明或按驗(yàn)證的方法進(jìn)行。
3.標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株-從國內(nèi)、外菌種收藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株經(jīng)復(fù)活并在適宜的培養(yǎng)基中生長后,既為標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株。
4.低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)等環(huán)境條件都可以抑制微生物的代謝和生長繁殖,因此低溫、干燥和真空是菌種保藏的重要手段。
5.標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株經(jīng)純度和特性確認(rèn)后保存時(shí),可將培養(yǎng)物等份懸浮于抗冷凍的培養(yǎng)基中,并分裝于小瓶中,建議采用低溫冷凍干燥,液氮儲存,超低溫冷凍(低于-70℃)等方法保存。
6.低于-70℃或低溫冷凍干燥可以延長菌種的保存時(shí)間.標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株可用于制備每月或每周一次轉(zhuǎn)種的工作菌株。
7.冷凍菌株一旦解凍轉(zhuǎn)種制備工作菌株后,不得重新冷凍或再次使用。
8.工作菌株不可代替標(biāo)準(zhǔn)菌株,標(biāo)準(zhǔn)菌株的商業(yè)衍生物僅可用作工作菌株。
9.不同的微生物,應(yīng)根據(jù)其生物特征來選擇zui適宜的保藏方法,菌種的保藏方法一般分四個(gè)階段:
⑴ 挑選特征典型的純菌菌落。
⑵確定保藏的合適菌體。
⑶選擇zui適宜的方法保藏。
⑷定期對保藏的菌種進(jìn)行檢查。
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