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ELISA試劑盒試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
安全性:
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B,一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2. 實難中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
試劑的準備:
1. 標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
20
ng/ml
(6號標準品)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
10
ng/ml
(5號標準品)
100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
5
ng/ml
(4號標準品)
100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5
ng/ml
(3號標準品)
100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
1.25
ng/ml
(2號標準品)
100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0.6
ng/ml
(1號標準品)
100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0
ng/ml
(空白對照)
原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋
試劑盒性能:
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人催產(chǎn)素受體ELISA檢測試劑盒操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
豬ELISA試劑盒結(jié) 果 判 斷 與 分 析:
1、 儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應(yīng)的OTR標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的OTR含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,ELISA試劑盒價格再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。
3、 檢測值范圍: 0-20ng/ml
4、 人催產(chǎn)素受體ELISA檢測試劑盒敏感度:0.1ng/ml
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