人骨肉瘤細(xì)胞又稱為HOS細(xì)胞。它可在無血清的狀態(tài)下培養(yǎng)。對于HOS細(xì)胞中的腫瘤干細(xì)胞相關(guān)亞群可以進(jìn)行篩選和鑒定人骨肉瘤細(xì)胞系。方法通過無血清懸浮培養(yǎng)初步富集骨肉瘤細(xì)HOS腫瘤干細(xì)胞，觀察其形成腫瘤干細(xì)胞球過程中的細(xì)胞形態(tài)，并在有血清培養(yǎng)基中誘導(dǎo)其分化。結(jié)論無血清懸浮培養(yǎng)可以初步富集人骨肉瘤細(xì)胞系HOS懸浮細(xì)胞球，且這些細(xì)胞具有腫瘤干細(xì)胞特性。

　　(HOS細(xì)胞)人骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法：

　　收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個細(xì)胞生長情況：

　　如果細(xì)胞未長滿，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

　　如果細(xì)胞已長滿(達(dá)80-90%)。即可進(jìn)行傳代，具體步驟如下：

　　a，棄去培養(yǎng)液，用PBS洗1-2次。

　　b，向瓶內(nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺，吸取胰蛋白酶，加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液，輕輕吹打細(xì)胞。

　　c，加入等量的的培養(yǎng)液，輕輕吹打混勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)

　　d，傳代比例：1:2-1:3
 

　　溫馨提示：培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)液是加入zui高藥物濃度的，為800ng/ml。我們采取緩慢增加藥物的梯度的方法。具體步驟是，首先加含200ng/mlTaxol藥物的培養(yǎng)液，放入培養(yǎng)箱，這段時間會有小部分細(xì)胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液可以去掉，等細(xì)胞待長滿就可以消化傳代了，這時可以一直用含藥物培養(yǎng)液來消化培養(yǎng)細(xì)胞，一兩代之后就可以將藥物濃度提高到500ng/ml，兩代后可以將藥物濃度提高至zui高水平800ng/ml，含藥物培養(yǎng)液用于細(xì)胞培養(yǎng)都沒有問題，凍存的時候就不要在凍存液里加藥物了。

　　(HOS細(xì)胞)人骨肉瘤細(xì)胞保存和應(yīng)用：

　　客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。