EBTr (NBL-4)細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱：EBTr (NBL-4)細(xì)胞

中文名稱：牛胚氣管細(xì)胞

種屬：牛

來(lái)源：

培養(yǎng)條件：

生長(zhǎng)狀態(tài)：

2017年新學(xué)期，迎著朝陽(yáng)，放飛夢(mèng)想，久別重逢，相聚一堂，百尺竿頭，更進(jìn)一步，學(xué)無(wú)止境，自立自強(qiáng)，為國(guó)爭(zhēng)光，慧穎細(xì)胞庫(kù)為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛，在新學(xué)期開學(xué)之際，將慧穎細(xì)胞庫(kù)1223株細(xì)胞特惠出售，更多活動(dòng)詳情，請(qǐng)致電市場(chǎng)部！

EBTr (NBL-4)細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好，形態(tài)不佳，透光度亦不好，如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過(guò)程沒(méi)問(wèn)題，那就核實(shí)下是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%，看看能否幫助貼壁，當(dāng)然也需要考慮血清問(wèn)題，還有確信拿來(lái)的細(xì)胞沒(méi)問(wèn)題。

有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存，實(shí)際上復(fù)蘇出問(wèn)題的可能非常小，因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，而且死板。

1、確認(rèn)下凍存的時(shí)候是不是消化的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個(gè)問(wèn)題，但我們因?yàn)檫@個(gè)問(wèn)題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專門做過(guò)試驗(yàn)，這個(gè)是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個(gè)原因。太長(zhǎng)的消化時(shí)間會(huì)讓細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時(shí)候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。

2、老師的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會(huì)死亡。

3、老師的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過(guò)7%，大于5%，太多也不好。

4、老師在凍存的時(shí)候是不是把DMSO混均勻，這個(gè)有一些影響，但不算太大。

5、老師的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格，很多人容易忘卻這個(gè)事情，因?yàn)檫@個(gè)東西流程長(zhǎng)。

6、如果老師的細(xì)胞污染，你是否能很快看到。從這個(gè)角度講建議去除離心這步。

7、老師的細(xì)胞在凍存前是否過(guò)密。

還有，我們是不贊成孵箱污染這個(gè)概念的，所有在一個(gè)孵箱里的細(xì)胞都污染一個(gè)細(xì)菌的話，這個(gè)細(xì)菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因?yàn)榉跸錈o(wú)論你如何處理都有大量的細(xì)菌，問(wèn)題在操作。我們的細(xì)胞房不換拖鞋，非常臟，別人的細(xì)胞都污染，很多細(xì)胞都污染到絕種，但我們的只污染一次（兩年內(nèi)只有兩瓶），那次是因?yàn)楫?dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫(kù)給動(dòng)過(guò)了，我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染，我們會(huì)認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗(yàn)。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問(wèn)題，這個(gè)很重要，不能靠猜。

EBTr (NBL-4)細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

CHL 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠 肺；自發(fā)永生；雌性 DMEM 貼壁

R 1610 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠

V79 倉(cāng)鼠肺細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠 肺；自發(fā)永生；雄性 DMEM 貼壁

CHO/dhFr- 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞,二氫葉酸還原酶缺陷 中國(guó)倉(cāng)鼠

CHO-K1 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株 中國(guó)倉(cāng)鼠 卵巢；自發(fā)永生；雌性 F12K 貼壁

CTLA4 Ig-24 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠

Lec1 倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞 中國(guó)倉(cāng)鼠

HMy2.CIR 人B淋巴母細(xì)胞 人 B細(xì)胞；EBV轉(zhuǎn)染；女性 IMDM 懸浮

hFOB 1.19 人SV40轉(zhuǎn)染成骨細(xì)胞 人 成骨細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；條件永生；女性 DMEM/F12 貼壁

HBL-100 人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞 人 乳腺；上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；男性 1640 貼壁

EA.hy926 人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞 人 臍靜脈；內(nèi)皮細(xì)胞；A549融合；女性 DMEM 貼壁

WISH 人羊膜細(xì)胞 人 宮頸癌；女性 EMEM 貼壁

RWPE-1 人正常前列腺上皮細(xì)胞 人 前列腺上皮；HPV18轉(zhuǎn)化；男性 F12K/1640 貼壁

SV-HUC-1 人輸尿管上皮永生化細(xì)胞 人 輸尿管上皮；SV40轉(zhuǎn)化；男性 F12K 貼壁

WPMY-1 人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞 人

Pt K1 (NBL-3) 袋鼠腎細(xì)胞 長(zhǎng)鼻袋鼠

Ana-1 小鼠巨噬細(xì)胞 小鼠 巨噬細(xì)胞；J2逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染；C57BL/6 1640 懸浮

MC3T3-E1 Subclone 14 小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克隆14 小鼠 前骨細(xì)胞；自發(fā)永生；C57BL/6 EMEM 貼壁

A9 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 小鼠

LWnt-3A 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞 小鼠

3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 小鼠 胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；Swiss albino DMEM 貼壁

3T6-Swiss albino 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 小鼠 胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；Swiss albino DMEM 貼壁

BALB/3T3 clone A31 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 小鼠 胚胎；成纖維；自發(fā)永生；雄性；BALB/c DMEM 貼壁

C2C12 小鼠成肌細(xì)胞 小鼠 成肌細(xì)胞；自發(fā)永生，雌性；C3H DMEM 貼壁

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L] 小鼠成纖維細(xì)胞 小鼠 成纖維細(xì)胞；自發(fā)永生；雄性；C3H/An

TM3 小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞 小鼠 睪丸間質(zhì)；自發(fā)永生；雄性 1640 貼壁

B95-8 絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞 絨猴 白細(xì)胞；EBV轉(zhuǎn)化 1640 懸浮

Mv.1.Lu(NBL-7) 貂肺上皮細(xì)胞 貂 肺；自發(fā)永生 DMEM/EMEM 貼壁

MCF7 [MCF-7] 人乳腺癌細(xì)胞 人 浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；女性 EMEM

MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞 人 乳腺腺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；女性 L15

MDA-MB-415 人乳腺腺癌細(xì)胞 人 乳腺腺癌；胸腔積液轉(zhuǎn)移；女性 L15

MDA-MB-435S 人乳腺導(dǎo)管癌 人

C-33 A 人子宮頸癌 人

HeLa 人宮頸癌細(xì)胞 人 宮頸癌；女性 DMEM

HeLa 229 人宮頸癌細(xì)胞 人 宮頸癌；女性 EMEM

ME-180 人子宮頸表皮癌細(xì)胞 人 宮頸鱗狀細(xì)胞癌；女性 EMEM

MS751 人子宮頸表皮癌細(xì)胞 人

SiHa 人子宮頸鱗癌細(xì)胞 人 宮頸鱗狀細(xì)胞癌；女性 EMEM

JAR 人胎盤絨毛癌細(xì)胞 人

JEG-3 人絨毛膜癌細(xì)胞 人 妊娠性絨毛膜癌；腦轉(zhuǎn)移；女性 EMEM

RD 人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞 人 胚胎性橫紋肌肉瘤；女性 DMEM

A-375 人惡性黑色素瘤細(xì)胞 人 無(wú)黑色素黑色素瘤；女性 DMEM

為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運(yùn)輸、培養(yǎng)帶來(lái)的真菌等污染問(wèn)題，公司特做以下建議：

1）細(xì)胞的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移過(guò)程中，請(qǐng)勿打開自封袋；拿放細(xì)胞時(shí)請(qǐng)持瓶體，切勿在非無(wú)菌環(huán)球中碰觸、擰動(dòng)瓶口封口膜位置

2）進(jìn)入生物安全柜前，打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶，噴上酒精放進(jìn)操作臺(tái)（不建議使用酒精棉球擦拭），撕開封口膜后，用酒精燈外焰對(duì)瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶，擰開瓶蓋（如是貼壁細(xì)胞，請(qǐng)用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基，切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶?jī)?nèi)）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無(wú)菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)