YD-8細胞，傳細胞培養(yǎng)

上?；鄯f生物為廣大客戶提供高質(zhì)量的免疫學和生命科學相關產(chǎn)品。質(zhì)量可靠，被全國各大院?？蒲袡C構認可并為Elisa試劑盒（囊括種屬：小鼠Elisa試劑盒、大鼠Elisa試劑盒、人Elisa試劑盒、犬Elisa試劑盒、雞Elisa試劑盒、猴子Elisa試劑盒、植物Elisa試劑盒） 標準品對照品  生化試劑產(chǎn)品長期供應商。*，質(zhì)量保證。索取elisa試劑盒說明書。了解ELISA試劑盒代測 ELISA檢測試劑盒說明書等詳細信息YD-8細胞，傳細胞培養(yǎng)

YD-8細胞，傳細胞培養(yǎng)[實驗步驟1]

1、準備工作：1）肥皂洗手，在進行無菌操作前，用75% 的酒精擦拭雙手，注意指間，和指甲周圍。同時，用酒精棉球擦拭超凈臺。2）將培養(yǎng)液放置室溫，備用。3）打開超凈臺內(nèi)的紫外燈，照射20 min。同時，將實驗所需材料也放入超凈臺進行滅菌（血清、培養(yǎng)基除外）4）倒置顯微鏡下，觀察細胞的狀態(tài)，是否已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，需要進行分瓶。

2、關閉超凈臺的紫外燈，打開風機。

3、點燃酒精燈，取出刻度吸管，在火焰上略燒，然后，安上吸球待用。

4、在打開培養(yǎng)瓶之前，用酒精棉球擦拭瓶蓋，打開后，瓶口在酒精燈上過火焰，再用吸管輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，注意，吸管不要碰到布滿細胞的培養(yǎng)瓶的側(cè)壁。

5、將胰酶加入培養(yǎng)瓶內(nèi),顯微鏡下隨時觀察，見到細胞的突起消失，變圓時，立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，吸出胰酶。記住不要消化時間過長，否則，細胞會被胰酶消化掉。

6、加入適量Hanks液或培養(yǎng)基清洗一遍，立即倒掉。

7、加入含有10%血清的培養(yǎng)基，用吹打管吹打，一定要輕輕吹打，使其從瓶壁上脫落分散到培養(yǎng)基中，再補加培養(yǎng)基，按1:3進行分瓶。然后，用火焰燒培養(yǎng)瓶的瓶口和蓋，再蓋好培養(yǎng)瓶的蓋，放到培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

以上介紹的是貼壁細胞的傳代培養(yǎng)方法，對于懸浮細胞的傳代培養(yǎng)方法，只需要將細胞進行離心，1000 rpm，5 min,然后，換入新的培養(yǎng)基即可。再分裝到不同的培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。

不健康的細胞質(zhì)中有空泡，細胞內(nèi)有顆粒樣物質(zhì)，細胞間空隙增大，變形，不規(guī)則，失去原有的特點。

4. 是否污染：

傳代或換液24~ 48 h注意觀察細胞是否被污染，污染的細胞培養(yǎng)液變渾濁，鏡下可見有大量菌絲。如果細胞生長緩慢，生長特性改變，胞質(zhì)內(nèi)顆粒性物質(zhì)增多，盡管培養(yǎng)液不變渾濁，考慮可能有支原體污染。污染的細胞立即從培養(yǎng)箱中取走，以免污染其它細胞。

實驗四、細胞凍存與復蘇

YD-8細胞，傳細胞培養(yǎng)[實驗步驟2]

1. 為了保證細胞良好的狀態(tài)，在細胞凍存的前一天使細胞處于對數(shù)增長期，同時將細胞換液，次日，按照細胞傳代培養(yǎng)方法，用胰酶消化貼壁細胞，將細胞用培養(yǎng)基沖下來，然后，用50 mL尖底離心管離心，1000 rpm，4min，棄上清，收集細胞。

2. 加入適量的凍存液（10% DMSO 和 90%含有20%血清的IMDM培養(yǎng)基）

3. 分裝到凍存管中，做好標記，標明細胞名稱，保存時間，所用培養(yǎng)基等。

4. 4℃放置30 min；-20℃放置1.5 h； -70℃放置12 h；zui后移到液氮罐中。

細胞的復蘇：

細胞的復蘇原則是快速溶化，因為如果緩慢的溶化，會使進入細胞的水分形成冰晶，對細胞造成傷害，因此，在復蘇細胞時，將凍存細胞直接放到37℃的水浴中，使其迅速溶解。在超凈臺內(nèi)將凍存管內(nèi)的細胞懸浮液直接倒入小培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)，然后，加入3 mL的培養(yǎng)液。次日，觀察細胞生長情況，并更換細胞培養(yǎng)液。

YD-8細胞，傳細胞培養(yǎng)企業(yè)相關產(chǎn)品

SUER0060(XR)  NCI-H524細胞，人非小肺癌細胞

SUER0061(XR)  NCI-H838細胞，人非小肺癌細胞

SUER0062(XR)  NCI-H1650細胞，人非小肺癌細胞

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SUER0064(XR)  NCI-H358細胞，人非小肺癌細胞

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SUER0066(XR)  NCI-H2087細胞，人非小肺腺癌細胞

SUER0067(XR)  CHMAS細胞，人肥大白血病細胞

SUER0068(XR)  A-427細胞，人肺癌細胞

SUER0069(XR)  Calu-1細胞，人肺癌細胞

SUER0070(XR)  PC14細胞，人肺癌細胞

SUER0071(XR)  PC9細胞，人肺癌細胞

SUER0072(XR)  SPC-A-1細胞，人肺癌細胞

SUER0073(XR)  NCI-H292細胞，人肺癌(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)細胞

SUER0074(XR)  MSTO-211H細胞，人肺癌株細胞

SUER0075(XR)  QG-56細胞，人肺扁平上皮癌細胞

SUER0076(XR)  PLA-800D細胞，人肺巨癌細胞

SUER0077(XR)  HTB-182細胞，人肺鱗癌細胞

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SUER0080(XR)  SK-MES-1細胞，人肺鱗癌細胞

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SUER0083(XR)  NCI-H226細胞，人肺鱗癌細胞

SUER0084(XR)  Calu-6細胞，人肺退行性癌細胞

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SUER0088(XR)  LAX細胞，人肺腺癌細胞

SUER0089(XR)  LTEP-A2細胞，人肺腺癌細胞

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SUER0095(XR)  NCI-H596細胞，人熱肺腺鱗癌細胞

SUER0096(XR)  97H細胞，人肝癌細胞

SUER0097(XR)  BEL-7402細胞，人肝癌細胞

SUER0098(XR)  BEL-7404細胞，人肝癌細胞

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SUER0102(XR)  Hep B1.2細胞，人肝癌細胞

SUER0103(XR)  Hep G2細胞，人肝癌細胞

SUER0104(XR)  Hep3B細胞，人肝癌細胞

SUER0105(XR)  Hep3B2.1-7細胞

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SUER0110(XR)  HKC細胞，人肝癌細胞

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SUER0118(XR)  SMMC-7721細胞，人肝癌細胞

SUER0119(XR)  SMMC-7721*細胞，人肝癌細胞

SUER0120(XR)  SNU-739細胞，人肝癌細胞

SUER0121(XR)  MHCC-97H細胞，人肝癌（高轉(zhuǎn)移）細胞

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SUER0124(XR)  HuH-6細胞，人肝母瘤細胞

SUER0125(XR)  HCCC-9810細胞，人肝內(nèi)膽管癌細胞

SUER0126(XR)  HCCLMS細胞，人肝轉(zhuǎn)移癌細胞

SUER0127(XR)  95-D細胞，人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞

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YH-13細胞，傳代細胞培養(yǎng)

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YH-13細胞，傳代細胞培養(yǎng)[實驗步驟1]

1、準備工作：1）肥皂洗手，在進行無菌操作前，用75% 的酒精擦拭雙手，注意指間，和指甲周圍。同時，用酒精棉球擦拭超凈臺。2）將培養(yǎng)液放置室溫，備用。3）打開超凈臺內(nèi)的紫外燈，照射20 min。同時，將實驗所需材料也放入超凈臺進行滅菌（血清、培養(yǎng)基除外）4）倒置顯微鏡下，觀察細胞的狀態(tài)，是否已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶，需要進行分瓶。

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4、在打開培養(yǎng)瓶之前，用酒精棉球擦拭瓶蓋，打開后，瓶口在酒精燈上過火焰，再用吸管輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，注意，吸管不要碰到布滿細胞的培養(yǎng)瓶的側(cè)壁。

5、將胰酶加入培養(yǎng)瓶內(nèi),顯微鏡下隨時觀察，見到細胞的突起消失，變圓時，立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，吸出胰酶。記住不要消化時間過長，否則，細胞會被胰酶消化掉。

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不健康的細胞質(zhì)中有空泡，細胞內(nèi)有顆粒樣物質(zhì)，細胞間空隙增大，變形，不規(guī)則，失去原有的特點。

4. 是否污染：

傳代或換液24~ 48 h注意觀察細胞是否被污染，污染的細胞培養(yǎng)液變渾濁，鏡下可見有大量菌絲。如果細胞生長緩慢，生長特性改變，胞質(zhì)內(nèi)顆粒性物質(zhì)增多，盡管培養(yǎng)液不變渾濁，考慮可能有支原體污染。污染的細胞立即從培養(yǎng)箱中取走，以免污染其它細胞。

實驗四、細胞凍存與復蘇

YH-13細胞，傳代細胞培養(yǎng)[實驗步驟2]

1. 為了保證細胞良好的狀態(tài)，在細胞凍存的前一天使細胞處于對數(shù)增長期，同時將細胞換液，次日，按照細胞傳代培養(yǎng)方法，用胰酶消化貼壁細胞，將細胞用培養(yǎng)基沖下來，然后，用50 mL尖底離心管離心，1000 rpm，4min，棄上清，收集細胞。

2. 加入適量的凍存液（10% DMSO 和 90%含有20%血清的IMDM培養(yǎng)基）

3. 分裝到凍存管中，做好標記，標明細胞名稱，保存時間，所用培養(yǎng)基等。

4. 4℃放置30 min；-20℃放置1.5 h； -70℃放置12 h；zui后移到液氮罐中。

細胞的復蘇：

細胞的復蘇原則是快速溶化，因為如果緩慢的溶化，會使進入細胞的水分形成冰晶，對細胞造成傷害，因此，在復蘇細胞時，將凍存細胞直接放到37℃的水浴中，使其迅速溶解。在超凈臺內(nèi)將凍存管內(nèi)的細胞懸浮液直接倒入小培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)，然后，加入3 mL的培養(yǎng)液。次日，觀察細胞生長情況，并更換細胞培養(yǎng)液。

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